原理
樣品經(jīng)提取液提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓笸ㄟ^(guò)鍵合有嘔吐毒素特殊抗體的免疫親和柱。此時(shí),嘔吐毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱IAC-SEP上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將嘔吐毒素從親和柱上洗脫下來(lái)。最后,用HPLC或熒光計進(jìn)行定量檢測
注意事項
使用前,免疫親和柱需回至室溫(22~25℃)。
樣品添加回收試驗時(shí),標準品添加到樣品中,靜置2小時(shí)后或過(guò)夜,再進(jìn)行樣品前處理,否則會(huì )出現回收率偏低的現象。
3) 操作步驟中,樣品過(guò)柱,淋洗,洗脫時(shí),一定要控制好流速,不能太快,否則會(huì )使檢測結果偏低。
4) 如果將標準品直接過(guò)柱驗證回收率時(shí),一定要確保標準上柱液中甲醇濃度不要超過(guò)5%,否則會(huì )影響柱子的吸附能力。
5) 試驗中使用的玻璃儀器等,一定要清洗干凈,尤其是用次氯酸等處理過(guò)的儀器,否則會(huì )使檢測結果偏低。
6) 當用氮氣濃縮洗脫液時(shí),氮氣流不要太大,否則會(huì )損失部分嘔吐毒素。
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